医药探秘 | 药典新规下的热原检测指南：MAT法究竟该谁用、何时用？

一、热原测试法规要求

1、中国药典2025版（通则9301）

法定检测方法：

• 家兔法

• 细菌内毒素检查法（BET）（包括重组C因子法）

• 报告基因法

• 单核细胞活性试验（MAT）

方法推荐优先级与核心要求：

• 常规药品首选 BET 或家兔法；

• 生物制品、复杂基质样品需结合 MAT 补充检测；

• 因鲎资源管控，鼓励 BET 替代方法（如重组 C 因子法）的验证与应用，但需提交完整方法学验证资料。

 

2、欧洲药典（补编 11.8 生效后）

法定检测方法：

• 单核细胞活性试验（MAT，通则 2.6.30）

• 细菌内毒素检查法（BET）（包括重组C因子法）

方法推荐优先级与核心要求：

• 2025 年 7 月 1 日起全面取消家兔法，MAT 成为热原检测核心推荐方法；

• 原料药 / 制剂放行及工艺研发阶段，推荐用 MAT 排除非内毒素热原（NEPs）；

• 单独使用 BET 需提交风险评估报告，证明无 NEPs 污染风险。

 

3、美国药典 USP（<151>热原测试）

法定检测方法：

• 家兔法（保留但不强制）

• 细菌内毒素检查法（BET）（重组C因子法也被纳入 “内毒素替代检测技术” 范畴）

• 经验证的体外替代方法（含 MAT）

方法推荐优先级与核心要求：

• 鼓励用 MAT 等体外方法替代家兔法，替代需符合 USP<1225> 验证标准；

• FDA 明确 MAT 验证需涵盖特异性、灵敏度、重复性等 8 项指标（《Pyrogen and Endotoxins Testing》指南）；

• 生物制品和进口药品优先认可 MAT 检测数据。

 

二、MAT法凭什么成为药典新宠

热原检测是药品与医疗器械上市前的 “安全门禁”，而单核细胞活化反应测定法（MAT）具有三大核心优势：

1. 广谱检测：既能识别革兰氏阴性菌的内毒素，更能精准捕捉革兰氏阳性菌、病毒、真菌等非内毒素热原（NEPs），解决了鲎试剂法 “漏检非内毒素热原” 的致命短板。
2. 贴合人体真实反应：利用人源单核细胞模拟人体免疫机制，通过检测 IL-6、TNF-α 等细胞因子释放量判断热原活性，结果比家兔法更贴近临床实际。
3. 合规与伦理双达标：符合欧盟、中国、美国药典标准，且以 “零动物消耗” 响应全球 3R（替代、减少、优化）监管导向。尤为关键的是，欧洲药典已正式删除家兔法检测条目，明确不再接受其作为热原检测合规方法，并将 MAT 列为推荐替代方案，这一调整已成为药企进入欧洲市场的 “合规门槛”。

 

各国法规关于MAT方法的规定：

1、中国药典2025版

• 通则9301：

单核细胞活化反应测定法仅作为热原检查的补充方法

2、欧洲药典

• 通则2.6.30：Monocyte activation test

MAT替代家兔热原检查（RPT）并能够同时检测内毒素和非内毒素热原的方法 

• 通则 5.1.10：Guidelines for using the test for bacterial endotoxins

为了排除原料药或制剂中存在非内毒素热原，推荐在放行或 生产工艺研发时使用单核细胞活化试验（2.6.30） 

• 新通则 5.1.13：热原性（Pyrogenicity） 修订后的文本将在《欧洲药典》补编 11.8中发布

- 取消家兔热原检查（2025.7.1生效），鼓励采用合适的体 外替代方法如MAT

- 生产工艺的开发过程中应进行MAT

- 选择BET作为唯一的热原评估方法时，需要进行风险评估

3、美国药典 USP<151>

• PYROGEN TEST

在适当情况下，经过验证的、等效的体外热原或细菌内 毒素试验可替代体内家兔热原试验；

替代方法要根据USP<1225>进行MAT的验证

4、FDA

• Guidance for Industry  Pyrogen and Endotoxins Testing: Questions and Answers

指出根据USP<1225>进行MAT的验证

 

三、精准匹配：这些场景必用 MAT 法！

 

1、生物制品：疫苗、抗体药的 “放行刚需”

生物制品生产工艺复杂，极易混入病毒、真菌等非内毒素热原，MAT 法成为其热原强制检测的优选：

• 疫苗研发与放行：人用狂犬病疫苗、HPV 疫苗等在生产过程中需监控热原污染，MAT 法可在2天内完成检测。对于有欧洲出口需求的企业，因欧洲药典不再接受家兔法，MAT 法已成为疫苗产品欧盟上市申报的必选检测方案之一。

• 基因工程药物检测：抗体药、细胞治疗产品等复杂基质样品，而 MAT 法通过标准化单核细胞系消除基质影响，批间 CV 值可控制在 5% 以内。

 

2、医疗器械：植入类产品的 “安全底线”

骨科植入物、透析器等直接接触血液的器械，热原污染可能引发败血症，MAT 法的固体样品检测能力不可或缺：

• 植入物安全性评估：金属、塑料等固体材料可通过浸提处理后检测，针对欧洲市场的医疗器械，由于家兔法已不被欧洲药典接受，MAT 法检测报告成为 CE 认证的核心支撑材料。

• 一次性医疗用品监控：输液器、注射器等产品的热原检测中，MAT 法可避免鲎试剂法的假阳性问题，助力企业同时通过 FDA 21 CFR Part 11 认证与欧盟合规要求。

 

3、特殊药品：破解 “低内毒素回收” 难题

部分化学药、血液制品存在 “低内毒素回收（LER）” 现象，即样品中的内毒素被基质包裹导致传统方法漏检，可尝试使用MAT 法能通过细胞活化机制突破基质干扰：

• 促肝细胞生长素注射液等生物制剂检测中，MAT 法回收率稳定在 80%-120%，远优于重组 C 因子法的 60% 下限。

• 放射性药品、鞘内注射剂等严格限制热原含量的特殊制剂，可通过 MAT 法超高灵敏度实现精准管控。对于计划进入欧洲市场的此类药品，MAT 法是唯一符合欧洲药典要求的热原检测路径，家兔法检测结果将不被监管机构认可。

 

四、避坑指南：这些情况优先选 MAT 法替代传统方案

 

1、传统方法局限

• 鲎试剂法：仅检内毒素

• 家兔法：操作繁琐、周期长（3 天）；欧洲药典已不接受

2、适用场景转换建议

• 疫苗、基因药检测

• 紧急上市药品放行；出口欧洲的医药产品检测

3、MAT法解决方案

• 全覆盖内毒素 + 非内毒素热原

• 无需动物设施；完全符合欧洲药典合规要求

按公式计算最大有效稀释倍数（MVD=CLC×c/LOD），确保样品浓度在检测线性范围内。

 

五、我们的服务

华测医药提供全品类 MAT 法检测服务：包括生物制品，医疗器械，特殊药品等；

法规跟进及时：设立专业团队追踪药典更新，适配欧洲药典补编 11.8、中国药典 2025 版等新规要求，保障检测流程合规。