药学CMC视角丨华测医药AUC在多肽类药物表征中的应用

以利拉鲁肽、司美格鲁肽、替尔泊肽为代表的GLP-1受体激动剂，已成为II型糖尿病与减肥领域增长最快的药物类别。但此类多肽物理稳定性脆弱：单链分子量小、制剂浓度高、呈两亲性α-螺旋，加之脂化修饰引入的疏水链，在生产与储存中极易自组装形成二聚体、寡聚体乃至淀粉样纤维，影响药效、免疫原性与货架期。分析型超速离心（AUC）无需标准品、无需标记，可直接测定溶液中多肽的寡聚体分布、自缔合及相互作用等关键质量属性，为处方筛选与稳定性考察提供关键数据。

 

华测医药贝克曼Optima AUC

 

一、GLP-1为什么容易聚集？

GLP-1由31个氨基酸组成，溶液中呈两亲性α-螺旋，既可经“单体→寡聚体→纤维”路径形成淀粉样纤维，也会形成偏离纤维化路径、却长期稳定的低分子量寡聚体。这类聚集并非只在极端条件下发生，而是制剂pH与浓度窗口内的平衡行为。

如GLP-1类似物LY307161在pH 3条件下以单体形式存在，而在pH 7.5~10.5时表观分子量随浓度显著升高，并可进一步形成以分子间β-折叠为特征的可溶性非共价聚集体。此外，脂化修饰是GLP-1类药物延长半衰期的关键策略，但脂链在延缓清除的同时降低了多肽溶解度、提高了α-螺旋含量，并使寡聚体更大、更稳定。

 

图1. 不同 pH 值下 LY307161 的表观分子量随浓度变化的沉降平衡数据

 

二、法规与指导原则要求

在监管认可度方面，USP、NMPA/CDE、EMA及FDA等监管机构已认可并推荐AUC作为多肽药物正交表征方法。2025年版《中国药典》相关通则/指导原则亦推荐正交方法用于生物大分子表征。AUC分析中样品无须稀释、不经色谱柱基质，避免了稀释诱导的聚集体解离或柱吸附导致的回收率损失与定量失真，正成为多肽聚集态分析、处方筛选与稳定性评价中的关键正交工具。

 

多肽相关研究法规及指导原则

来源	标题	内容
USP-NF	Quality Attributes of Synthetic Peptide Drug Substances（USP-NF<1503>）	寡聚体/聚合物或聚集体纳入肽相关杂质列表，明确可用AUC分析，并强调方法需正交。
EMA	Guideline on the Development and Manufacture of Synthetic Peptides，2026	明确高级结构表征应包括聚集体，建议采用适宜技术研究。
NMPA	化学合成多肽药物药学研究技术指导原则（试行），2023年	对于多肽仿制药物，推荐采用正交方法进行高级结构表征，AUC为可选正交方法之一。

 

三、AUC在多肽药物中的典型应用

AUC在多肽药物中的应用不仅限于聚集分析，还包括高级结构可比性和相互作用表征。以下从三个维度展示实际案例。

案例1：GLP-1寡聚体分布与稳定性监测

方法：SV-AUC，考察GLP-1及其C端酰胺化类似物GLP-1-Am在新鲜制备及37 ℃、180 rpm振荡7天后的寡聚体谱。

结果：新鲜样品中二聚体已超过40%，振荡后出现五聚体、十三聚体及更高级寡聚体等新生峰。AUC不经稀释、无柱吸附，检出了SEC难以捕捉的瞬时弱缔合寡聚体。

 

图2. SV-AUC直接区分GLP-1及GLP-1-Am中的单体与各寡聚体组分

 

案例2：合成利拉鲁肽与原研药可比性研究

方法：在光谱、NMR与体外功能联用的正交表征框架下，对多批化学合成利拉鲁肽与rDNA来源参比制剂开展SV-AUC头对头比较。

结果：全部样品呈1.56~1.59 S的单一对称峰；合成品与原研沉降系数1.574±0.007 S vs. 1.583±0.007 S，表观分子量24.81 kDa vs. 24.96 kDa，表观聚集数6.5~6.8，c(s)分布完全重叠，支持两者处于相同缔合区间。

图3. 化学合成利拉鲁肽与rDNA原研的SV-AUC c(s)分布高度一致（3058200701–03：化学合成测试品，KS开头：参比制剂商业批）

 

案例3：司美格鲁肽与白蛋白结合表征

方法：SV-AUC，类似物与单体HSA于PBS（pH 7.4）中共存，计算结合分数。

结果：天然GLP-1几乎不结合HSA；随修饰脂链增长（C16→C18→C20），相对结合显著增强，与半衰期延长趋势一致。AUC无需标记即可完成溶液态结合定量。

 

图4. SV-AUC测定GLP-1类似物相对HSA的结合亲和力（相对利拉鲁肽）

 

四、华测医药AUC服务能力

华测医药AUC平台配备贝克曼库尔特Optima分析型超速离心机，搭载UV/Vis与瑞利干涉双光学系统，支持SV与SE双模式，检测能力覆盖四大方向：

• 分子量测定：沉降平衡法测定天然溶液态绝对分子量及分布；
• 纯度与聚集体：单体/寡聚体组分定量，为SEC、DLS提供正交验证，解决瞬时弱缔合物种“看不见”的问题；
• 相互作用：无需固定或标记，直接测定nM~mM范围的亲和力与化学计量比；
• 构象与粒径：环境因素引起的构象变化及纳米药物、辅料大分子的聚集状态。

针对GLP-1等多肽药物，可提供寡聚体分布分析、处方筛选与稳定性监测的一站式方案，数据交付符合NMPA申报要求，欢迎扫码咨询。