生物分析前沿丨临床试验中病理样本的全流程管理到分子检测的合规实践

病理样本是药物及医疗器械临床试验的核心原始资料，其形态完整性、抗原稳定性及核酸完整性直接决定病理诊断、免疫组化与分子检测结果的可靠性，是临床试验数据真实、可溯源、可核查的重要保障。与常规临床病理样本不同，临床试验病理样本管理需严格遵循药物临床试验质量管理规范（GCP）及国内病理质控体系，实现全流程标准化、规范化、痕迹化管控。本文围绕病理样本采集、固定、包埋、切片制备及分子检测全链条，系统梳理各环节合规要求、关键质控要点及风险防控策略，为临床试验病理样本标准化管理提供实践参考。

一、核心合规原则与依据

临床试验病理样本管理以保障样本质量、确保数据真实完整、实现全程可追溯为核心目标，严格规避样本降解、污染、错配及记录缺失等合规问题。管理工作依托多重权威规范体系，遵循《药物临床试验质量管理规范（2020年版）》、《临床病理诊断中心建设与管理指南》及CAP认证规范，构建完善的合规管理体系。

全流程管控坚守三项核心原则：其一，溯源全覆盖原则，人员、设备、试剂、操作、结果全程留痕；其二，质控前置化原则，将质量管控嵌入各操作环节，实现事前防控、事中管控、事后复核；其三，操作标准化原则，统一批次样本处理参数，保障试验数据的一致性与可比性。

二、样本管理流程中的质控要点

01样本采集：筑牢临床试验样本合规的第一道防线

样本采集是病理质量控制的首要关键环节，离体后组织自溶、抗原降解、核酸断裂等不可逆损伤，是导致后续检测偏倚的主要源头因素，为临床试验核查重点关注内容。该环节核心管控指标为冷缺血时间、取材规范性及样本标识溯源性。

严格管控冷缺血时间为核心质控底线。临床试验手术及活检标本离体后，需在30～60 min内完成取材并进入固定流程，穿刺小活检标本需进一步压缩离体暴露时长，杜绝室温长时间放置引发的组织自溶、蛋白变性，从源头保留组织形态、抗原及核酸完整性。

标准化规范取材操作。取材工作由具备资质的病理技术人员完成，严格遵循临床试验方案，优先选取目标病变组织，规避坏死、出血及脂肪冗余区域。组织块厚度统一控制在3～4 mm，保证固定液均匀渗透；操作中避免牵拉、挤压组织，防止人为结构损伤。取材后样本立即装入专属无菌样本盒，杜绝交叉污染。

溯源与伦理合规为硬性管控要求。所有试验样本采用唯一编码标识，盲态试验使用专用盲号，隐匿受试者隐私信息，实现全链条条码追溯。受试者知情同意书需明确样本用途、检测范围、保存及处置方式，严格恪守《人类遗传资源管理条例》《药物临床试验质量管理规范》，严禁超方案、超伦理使用样本。

02样本固定：组织结构与生物活性保留的核心关键

固定的核心目的是快速凝固组织细胞成分、终止组织自溶、稳定抗原与核酸结构，固定试剂、液量、时长的不规范操作，是临床试验样本不合格的主要诱因，需严格执行标准化合规操作。

固定试剂统一采用3.7%～4%中性缓冲甲醛溶液（NBF，pH 7.2～7.4），禁用未缓冲甲醛、过期变质固定液。固定液需现配现用，24 h内完成使用，避免试剂聚合失效，可同时满足组织形态观察、免疫组化及各类分子检测的样本质量要求。

精准把控固定参数。固定液与组织体积比严格维持10:1，最低不低于4:1，确保组织完全浸没无暴露。固定时长实行分级管控：穿刺小活检标本固定6～12 h，常规手术标本固定24～48 h，严格杜绝固定不足导致的组织自溶，或过度固定引发的蛋白交联、抗原封闭、核酸降解问题。操作需完整记录固定液参数、固定时长、环境温度等原始数据，确保全程可核查。

03脱水包埋：FFPE样本标准化制备与归档

脱水、浸蜡、包埋是样本处理的中间关键环节，易被忽视但直接影响样本长期稳定性与后续检测质量，需落实标准化合规质控。

样本前处理采用全自动组织脱水机完成梯度乙醇脱水、环保透明剂透明标准化流程，程序化设置处理时长与温度，减少人工操作误差，避免脱水不全、透明过度导致的组织脆裂、结构模糊，保障批次样本处理一致性。

规范浸蜡与包埋操作。选用合规熔点纯净石蜡恒温浸蜡，确保石蜡充分渗透组织间隙；包埋时精准定位组织切面，平整摆放组织，杜绝组织折叠、缺损、气泡残留，充分暴露目标病变区域。包埋完成后，石蜡块标注唯一试验编号与病理编号，与前期样本信息精准对应。

FFPE石蜡块实行合规归档管理，存放于干燥、避光、防虫的专用恒温档案柜，建立完善的入库、借阅、归还、销毁登记制度，明确样本保存期限，满足临床试验长期溯源与复检需求，同步留存全批次包埋质控记录。

04切片制备：决定分子检测质量的终端前置质控

切片质量直接影响染色效果与分子检测精度，需根据HE形态观察、免疫组化、核酸检测等不同试验目的，实施差异化精细化质控，杜绝污染、褶皱、厚度不均等质量缺陷。

切片厚度按检测项目标准化统一：IHC检测切片厚度3~4μm，保障显色均匀、判读清晰；NGS检测白片厚度4~10μm，满足核酸提取量要求。单临床试验全程统一参数，规避系统偏差，保障数据一致性。

防交叉污染为切片环节核心合规要求。不同样本操作间隙，需彻底清洁切片设备，避免微量污染导致NGS基因突变检测失真。烤片温度、时间固化为SOP标准，杜绝过度烤片引发抗原丢失、DNA片段化。切片过程中及时剔除坏死组织、空白蜡层，确保有效病变组织占比符合试验标准。

严格管控白片存放时效，室温长期存放会造成肿瘤抗原衰减，影响IHC检测结果。超期切片需经病理医师质量评估，合格后方可使用，不合格样本直接剔除并记录偏差。分子检测前需镜下筛选肿瘤富集区域，剔除坏死及间质组织，明确肿瘤细胞比例，为检测结果解读提供依据。

三、分子检测：构建全流程闭环合规管理体系

分子检测是临床试验靶点验证、药物疗效评价的核心依据，对样本前处理合规性、检测体系稳定性、结果真实性要求极高，需严格遵循分子病理质控规范，落实全环节质控核查。

严格执行检测前双重质控。一是形态学质控，通过HE染色复核样本病变组织占比，剔除坏死率过高、有效组织不足的不合格样本；二是核酸质控，上机前检测核酸浓度、纯度及完整度，筛选符合PCR、二代测序等检测下限的合格样本，不合格样本及时登记、报备并终止检测。

标准化开展检测操作。全程使用有效期内、经验证的试剂与校准合格的仪器设备，严格遵循项目SOP流程。关键操作实行双人复核制度，重点核对样本编号、试剂配比、反应体系及上机参数。免疫组化检测需规范设置阳性、阴性对照，选用EP22等标准化克隆号抗体，保障检测结果特异性与准确性。

规范留存检测数据与剩余样本。分子检测原始图谱、数据、分析报告全程归档留存，数据真实完整、可追溯、不可篡改，完全契合GCP数据管理要求。检测剩余切片及石蜡块按规范归档保存，试验废弃物严格按照生物安全标准无害化处置，完整留存处置记录。

四、华测医药中心实验室病理+分子平台服务能力

华测医药中心实验室病理平台配置全套病理实验设备，可开展 HE 染色、石蜡及冰冻病理诊断、特殊染色、免疫组化、荧光原位杂交 FISH、多重免疫荧光等检测，拥有 300 + 种抗体、200 + 种 FISH 探针、20 + 种特染试剂，覆盖各病理亚专科，能够承接临床试验入排病理复核、中心实验室病理审查、生物标志物筛选、病理学缓解评估、疑难病理阅片、方法学开发验证等工作，可为前瞻性及各类临床研究提供完整的病理技术支撑。

分子平台配套完善的分子检测能力，搭载多平台 NGS 测序仪、qPCR、ddPCR 及核酸质控分析设备，可开展 SNP 基因多态性分析、肿瘤靶点检测、HRR/HRD 同源重组修复通路检测、全外显子 WESMRD 检测等，覆盖单基因到大 Panel 多基因测序，可实现 SNV、Indel、CNV、Fusion 变异解析，同时支持 CGT 药物全链条分析、微生物定性定量、16S 扩增子、mNGS 宏基因组测序，为药物基因组学、肿瘤伴随诊断、细胞基因治疗、微生物组相关临床及临床前研究提供全面分子技术支撑。

五、结语

病理样本全流程合规质控是创新药临床试验与伴随诊断研发的核心基础，前分析阶段的操作质量直接决定生物标志物数据可信度与试验结论科学性。全流程标准化操作、可追溯记录与常态化风险管控，是筑牢临床试验合规底线、保障新药研发质量的关键。

华测医药中心实验室坚持细化样本全流程 SOP，严格遵循行业共识，搭建完善质量管理体系，持续为医疗检测业务、大分子和CGT 领域创新药企提供可靠、合规的多方位技术解决方案，助力临床试验病理样本管理全链路质量可控，护航创新药物研发稳步推进。