复杂制剂质量研究｜体外生物等效性研究服务

在口服固体制剂的研发与仿制药一致性评价中，生物等效性（BE）研究是关键环节。然而，对于胃肠道局部作用药物（如硫糖铝、考来烯胺、司维拉姆等），由于其几乎不被吸收，传统的体内药代动力学（PK）方法难以适用。此时，体外生物等效性（IVBE）研究成为不可或缺的技术路径。

 

本文以硫糖铝口服制剂为例，深入解析其体外BE研究的核心内容——胆酸盐体外结合平衡试验与结合动力学研究，并延伸至同类药物（如考来烯胺、考来替泊、碳酸司维拉姆等）的共性技术要求，为药学研发与注册申报提供实用参考。

 

 

体外BE实验

• 胆汁盐的体外平衡结合研究

• 胆汁盐的体外动力学结合研究

• 体外酶（胃蛋白酶）活性研究（蛋白结合）

• 与人血清白蛋白（HSA）或牛血清白蛋白（BSA）的体外平衡结合研究（蛋白结合）

 

一、体外胆盐平衡结合研究

胆汁酸盐平衡试验：

应采用至少 8 种不同浓度的总胆盐，进行酸预处理和不进行酸预处理的条件下，每一种含胆盐的孵育液中应含有不用浓度的甘氨胆酸（GCA）、甘 氨 鹅 脱 氧 胆 酸（GCDA）和 牛 磺 脱 氧 胆酸（TDCA）。总胆盐浓度应根据其光谱吸收值变化而设定，直到确定达到最大结合量为止。

此外，还应提供数据证明在该时间内，在该总胆盐介质条件下已达到最大结合。基于总胆盐（GCA+GCDA+TDCA）结合平衡试验，参考上述磷酸盐平衡试验的计算方法，确定 k1和 k2，分别用受试和参比的 k1值计算受试/参比制剂的 k1比值，计算 k2的 90%置信区间，可接受标准为80%～120%。

具体计算参考体外平衡磷酸盐结合试验（如碳酸镧）：

公式中：SEQ为k2均值比的标准误；Q 为k2均值比；SEMA为A 制剂k2 均值的标准误；SEMB为B 制剂k2 均值的标准误；A 为A 制剂k2均值；B 为B 制剂k2均值。

 

1、酸不中和

试剂配制：

• 模拟肠液（SIF）：0.05 M磷酸钾缓冲液，不含酶，pH 6.8，符合美国药典（USP）规定。

• 胆酸盐水溶液的储备液在SIF中：制备一定浓度的胆酸盐储备液（根据剂型不同有所不同），摩尔比例为3:3:1：（GCA： GCDA：TDCA。）

实验过程：

• 准备8瓶T和8瓶R的孵育瓶，每瓶中含有1g（5ml）样品。加入2 ml的SIF并在室温下浸泡过夜。第二天，向每个容器中加入所需的SIF和胆酸盐储备液，使溶剂混合物的最终体积为10 ml。一组实验的孵育瓶将包括：1）8个T；2）8个R；3）四个空白；和4）八个标准品。将所有28个样品在37°C下孵育24小时。过滤收集滤液并测定胆酸盐的浓度。孵育后，用SIF稀释0.1 mM标准溶液滤液以获得第九个标准品。

• 应在上述条件下重复该实验12次，以获得12组数据

 

2、酸处理样品

将相当于1 的T 和R浸泡在10 mL 0.1 N 盐酸（HCl）中，在 37°C 下孵育 1 小时。随后进行离心，并吸出上清液。接着用模拟肠液（SIF）清洗该药物产品，直至 pH 达到 6.8。然后将经过酸预处理的产品浸泡在2 mL 模拟肠液（SIF）中在室温下过夜（约 16–24 小时）。其余实验过程同非酸处理样品。

 

3、部分实验结果

液相分离谱图及Langmuir方程的拟合。

上述图片为网络应用，并非实际研究内容，请切勿参考，仅做案例分享用。

 

二、胆酸盐结合动力学研究

该项研究用以支持关键性的平衡结合研究。应在2种不同浓度的胆盐溶液中孵育至少8个不同的时间长度，时间长度应分布合理直到达到最大结合。每项结合研究应至少重复12次。生物等效性评价指标是受试制剂和RLD硫糖铝与胆盐结合率的比较。

应将不经酸预处理的受试制剂和RLD，于2种不同浓度（0.3 mmol·L-1和3.0 mmol·L-1）的总胆盐溶液中孵育至少8个不同的时间长度。时间长度应分布合理直到达到最大结合。试验应该在37 ℃条件下进行。每一项结合试验应重复至少12次。

1、试液配制

材料：

• 胆汁酸的钠盐储备溶液：水中：制备一定浓度的胆酸盐储备液（根据剂型不同有所不同），摩尔比例为3:3:1：（GCA： GCDA：TDCA。）

• 0.1M的水溶性氯化钠。

• 1.0M的水溶性氯化钠。

2、实验过程

T 和 R 的孵育混合物制备：将相当于 1g：5ml的药物产品于室温下浸泡在 2 毫升 0.1 摩尔/升的氯化钠溶液中过夜。随后迅速向其中加入一定量胆酸盐溶液、0.8 毫升 1 摩尔/升的氯化钠储备液以及水适量，最终体积为 10 毫升、胆酸盐浓度为 0.3 毫摩尔/升的液体。按照上述方法，分别为 T 制备八份平行样，为 R 制备8份平行样。

空白配制：配制不含胆酸盐的样品溶液，胆酸盐溶液采用氯化钠代替。

胆酸盐标准溶液制备步骤：

• 制备0.1 mM和0.3 mM的标准溶液：

向适量体积的胆酸盐储备液中，加入1 mL 1.0 M的氯化钠储备液和水，使最终体积为10 mL，浓度为0.1mM与0.3mM。

将这两种标准溶液在37°C下孵育24小时，然后过滤并收集滤液。

• 制备其他浓度的标准溶液：

0.05 mM和0.075 mM的标准溶液：通过用0.1 M的氯化钠溶液稀释0.1 mM溶液的滤液得到。

0.15 mM和0.21 mM的标准溶液：通过用0.1 M的氯化钠溶液稀释0.3 mM溶液的滤液得到。

实验过程：

• 有8份含T的孵育混合物和8份每种含R的孵育混合物。

• 有6份空白孵育混合物。

• 有2种胆酸盐标准溶液。

• 每种含T或R的孵育混合物在37°C下按指定时间（0.25、0.50、1、2、4、8、16或24小时）孵育，然后过滤，收集滤液以测定胆酸盐的浓度。

• 计算不同时间点结合的胆酸盐量，绘制时间与结合量的图形。