原料药DNA、蛋白质、糖残留分析

服务背景

近期，国家药品监督管理局药品审评中心（CDE）在对酶催化合成的原料药进行新药评审时，关注到了催化反应的酶、淀粉、DNA等的残留。在生物制品（如单克隆抗体、重组蛋白、疫苗）的生产过程中，所使用的工程细胞（如CHO、HEK293）或宿主菌（如E.coli）的残留宿主蛋白（HCP）和残留宿主DNA可能引起免疫反应，影响产品安全性。因此，对蛋白、核酸、淀粉等的残留进行严格监控是产品放行的必检项目。华测医药药品检测服务建立了3种成分（DNA、蛋白质、糖）残留的分析方法。

 

原料药蛋白残留分析

根据中国药典2020版四部《9101 分析方法验证指导原则》中对分析方法与验证性能指标的规定，华测医药药品检测服务，按杂质定量分析方法的要求，进行方法学验证。考察的参数包括专属性、线性/范围、准确度、精密度（重复性/中间精密度）、检测限和定量限、溶液稳定性。

其方法的灵敏度，可以满足大部分的应用场景。

▶ 生物酶催化反应：具有专一性高、条件温和、绿色环保等优势，在原料药的生产过程得到日益广泛的应用。国际酶学委员会（I.E.C）根据酶所催化的反应类型，把酶分为6个大类 – 转移酶、水解酶、裂解酶、氧化还原酶、异构酶和连接酶等。制备API所用的酶催化剂，属于工艺杂质，需要控制其残留量。

▶ 蛋白质残留：蛋白质残留分为总蛋白残留检测和宿主蛋白残留检测。总蛋白的含量测定方法有凯氏定氮法、福林酚法（Lowry法）、双缩脲法、BCA法和考马斯亮蓝法（Bradford法）。其中考马斯亮蓝法和BCA法因灵敏度最高，不易被干扰，而受到青睐。该方法可测定1~200µg的蛋白质量。针对宿主蛋白残留，使用针对特定宿主细胞（如CHO、E.coli）的广谱抗体进行检测，定量限度可达ng级。

▶ 糖残留：无论是淀粉，还是多糖、寡糖，都可以利用水解法，把糖类转化为单糖，采用HPLC-CAD方法，检测糖的残留。

▶ DNA残留：分为总DNA残留和宿主DNA残留检测。针对总DNA残留检测，CTI采用通用型核酸荧光染色法，检测药物生产过程中总DNA的残留。宿主DNA残留检测可使用实时荧光定量PCR法，检测特定宿主的DNA序列，灵敏度可达pg级。

适用产品

适用于酶催化、或发酵制备的原料药，如维格列汀、盐酸去甲金霉素、阿托伐他汀钙、红霉素等。

适用于生物制品，如单克隆抗体、重组蛋白、疫苗、生长因子等

测试项目

3种成分（DNA、蛋白质、糖）残留检测与方法学验证。

测试项目	方法的检测限	定量限
总蛋白质残留	0.6µg/mL	2µg/mL
宿主蛋白残留	1ng/mL	1.5ng/mL
糖残留	1.7µg/mL	5µg/mL
总DNA残留	1.3ng/mL	2.5ng/mL
宿主DNA残留	0.01 ng/mL	0.03ng/mL

 

特色服务

水中易溶的API，单个方法检测所需要的样品量仅为2~3g，方法开发和验证需要20~30g样品。

 

服务对象

该产品服务于众多行业及领域，以下是具有代表性的客户对象：

1. 药品生产商；

2. 生物制药企业；

3. 药品研发实验室；

4. 高校和科研院所等。

 

服务流程