药学CMC视角丨华测医药提供呋塞米亚硝胺杂质检测及方法学验证服务

呋塞米是临床常用的高效能袢利尿剂之一，广泛用于水肿性疾病、高血压及急性肾衰的预防。作为基药与长期用药品种，其口服溶液、片剂、注射液多剂型并存，国内仿制竞争激烈，2025年国内医疗机构市场销售额约5-6亿元。

呋塞米分子本身含有一个仲胺结构，使其成为典型的亚硝胺原料药相关杂质（NDSRI） 前体，原料药自身即可在亚硝化试剂存在下转化为N-亚硝基呋塞米。这一风险已从理论推演走向监管现实：2026年3月，Leading Pharma, LLC因呋塞米片中N-亚硝基呋塞米超过FDA推荐摄入限值，启动II类召回。    

 

呋塞米	N-亚硝基呋塞米

 

一、N-呋塞米亚硝胺来源与限度

呋塞米的亚硝化风险根植于其分子结构。其分子中的仲胺氮原子在酸性条件下可与亚硝酸（由亚硝酸盐在酸性环境中生成）反应，形成N-亚硝基呋塞米。该反应在原料药合成后处理、制剂储存等环节均有可能发生，尤其在存在残留亚硝化试剂或微酸性微环境的条件下需予以关注。N-亚硝基呋塞米在FDA CPCA分类中属于第4类，AI为1500 ng/天。

 

N-亚硝基呋塞米生成路径

 

二、N-亚硝基呋塞米方法开发与验证

         针对呋塞米原料及制剂中N-亚硝基呋塞米的检测需求，华测医药建立了液相色谱-串联质谱联用法，并完成了系统验证。方法开发中重点关注亚硝胺分析常见的假阳性与基质干扰问题。

 

华测医药配备Agilent 6475 三重四极杆液质联用系统

 

方法开发的关键挑战：

• 供试品中呋塞米主成分浓度远高于目标杂质，存在离子抑制与离子源污染风险。
• N-亚硝基呋塞米在溶液中存在稳定性风险，有文献报道易出现降解。
• 限度在ppb级别，对仪器灵敏度提出极高要求。
• 目标物与主成分结构相似、保留行为接近。
• 亚硝胺分析常用的APCI源对其灵敏度较低。

华测医药采用安捷伦三重四极杆-液相色谱质谱联用仪进行检测，通过系统性研究，开发的方法适用于检测呋塞米原料及制剂中的N-亚硝基呋塞米，分析方法类型为杂质定量分析，定量限浓度＜1 ng/mL，完全满足该杂质限度检测要求。按照中国药典2025年版四部通则<9101 分析方法验证指导原则>进行方法验证，考察参数包括：专属性、系统适用性、线性/范围、准确度、精密度（重复性/中间精密度）、溶液稳定性、检测限和定量限、耐用性。

 

对照品溶液色谱图

供试品溶液色谱图

 

三、总结

华测医药围绕呋塞米中N-亚硝基呋塞米的LC-MS/MS方法开发与验证展开。针对原料药与制剂两种基质，建立了适配的色谱-质谱条件，并开展参数验证，方法定量限均低于相应限度要求，适用于呋塞米原料及制剂中N-亚硝基呋塞米的定量检测，可为呋塞米相关产品的杂质控制提供方法学参考。

华测医药依托专业的合成与质谱技术平台，致力于为客户提供从“潜在风险识别”到“放行方法建立”的一体化亚硝胺解决方案。

 

四、华测医药项目经验

华测医药已完成近百项亚硝胺风险评估、杂质定制合成和方法开发验证项目，覆盖创新药、仿制药（中间体及成品），成功协助客户通过CDE发补及FDA/EMA审计。典型案例如下：

 

序号	品种名称	服务内容
1	巴瑞替尼	亚硝化风险评估 + 亚硝胺定制合成
2	磷酸氯喹	亚硝化风险评估 + 亚硝胺定制合成
3	富马酸氯马斯汀	亚硝化风险评估 + 亚硝胺定制合成
4	愈创木酚磺酸钾	亚硝化风险评估 + 亚硝胺定制合成
5	枸橼酸莫沙比利	亚硝化风险评估
6	磷酸左奥硝唑酯二钠	亚硝化风险评估
7	丁酸氯维地平	亚硝化风险评估
8	盐酸尼卡地平	亚硝化风险评估
9	头孢克肟	亚硝化风险评估
10	盐酸乌拉地尔	亚硝化风险评估+方法开发验证
11	非奈利酮	亚硝化风险评估+方法开发验证
12	司美格鲁肽	亚硝化风险评估+方法开发验证
13	呋塞米	亚硝胺方法学开发验证
14	他达拉非	亚硝胺方法学开发验证
15	伏诺拉生	亚硝胺方法学开发验证
16	厄贝培南	亚硝胺方法学开发验证