LCMS特征肽段精确定量分析

服务背景

在生物药研发、疾病标志物发现及精准医学研究中，对复杂生物样本（如血浆、组织、细胞裂解液等）中目标蛋白或多肽的精准定量至关重要。基于液相色谱-质谱联用技术（LC-MS/MS）的特征肽段分析策略，通过特异性酶解生成代表性肽段，结合同位素内标校正，可实现无需抗体的高灵敏度、高特异性定量，尤其适用于低丰度靶标、翻译后修饰（PTM）变体及多肽药物的药代动力学研究。本服务依托高分辨及三重四极杆质谱平台，提供从方法开发到数据报告的全流程解决方案。

LCMS特征肽段精确定量分析

华测医药 · 临床生物分析服务为您提供LCMS特征肽段精确定量分析服务，拥有15000m²实验空间及350多台设备，覆盖GLP、CNAS等认证，以高通量支持生物分析，提供高附加值合同外服务，优化研发流程，致力于解决各类临床需求，助力新药研发与上市。

▮ 特征肽段筛选与验证

• 靶标特异性肽段筛选：1）基于蛋白序列及酶切位点预测（如Trypsin/Lys-C），避开可变修饰区域。2）通过理论碎裂模拟（Skyline软件）优化可检测的肽段序列。
• 肽段稳定性评估：验证酶解效率、基质干扰耐受性及冻融/长期储存稳定性。

 

▮ 定量方法开发与验证

• 内标策略：1）稳定同位素标记肽段（SIS peptide）作为内标，校正前处理及离子化效率偏差。2）针对修饰肽段（如磷酸化、糖基化），定制同位素标记修饰肽。
• 方法学验证：依据FDA/EMA生物分析方法验证指南，验证灵敏度（LLOQ）、精密度（RSD<15%）、准确度（±20%）、基质效应及选择性。
• 动态范围：横跨3-5个数量级（如1-1000 ng/mL）。

 

▮ 生物样本处理与检测

• 复杂基质前处理：高丰度蛋白去除（如血浆中Albumin/IgG免疫吸附）。
• 肽段富集：基于C18/Magnetic Beads的脱盐与浓缩。
• LC-MS/MS分析：1）色谱分离：优化梯度条件（反相/离子对色谱）实现目标肽段与干扰物分离。2）质谱检测：采用SRM/MRM模式（QqQ）或PRM模式（Orbitrap）进行靶向定量，确保高信噪比。

 

▮ 数据分析与报告

• 定量结果计算：通过内标法拟合标准曲线，计算目标蛋白/多肽浓度。
• 修饰肽段相对定量：基于特征碎片离子强度评估修饰位点占有率（如氧化、脱酰胺）。
• 合规性报告：提供原始数据、方法验证报告及符合GLP/GCP要求的结果解读。

应用场景

1. 单抗药物PK/PD研究

• 定量血清中治疗性抗体的特征肽段，评估暴露量-疗效关系。

2. 多肽药物代谢分析

• 追踪合成多肽（如GLP-1类似物）的体内降解动力学。

3. 生物标志物验证

• 定量血浆中疾病相关蛋白（如肿瘤标志物PSA）的差异表达。

4. 生物类似药可比性研究

• 对比原研药与仿制药的特征肽段浓度，支持一致性评价。

5. ADC药物DAR分析

• 通过偶联位点特征肽段定量，计算药物抗体比（DAR）。

服务优势

   高特异性   

• 通过特征肽段+碎片离子双重筛选，规避生物基质中同源蛋白干扰。

   灵敏度领先   

• 三重四极杆质谱（如SCIEX 6500+）可实现fg级低丰度肽段检测。

   无需抗体依赖   

• 突破传统LBA方法中抗体交叉反应、表位遮蔽等技术瓶颈。

   多重检测能力   

• 单次进样同时定量多个目标肽段（如药物原型与代谢产物）。

   全流程合规   

• 实验设计符合ICH M10、FDA Bioanalytical Method Validation指南要求。

服务流程

1. 需求确认

• 明确靶标蛋白/多肽序列、样本类型（如血浆、脑脊液）及定量目标（总蛋白/游离蛋白）。

2. 肽段设计与合成

• 合成天然肽段及同位素标记内标。
• 优化酶解条件（酶种类、时间、温度）。

3. 方法开发与验证

• 建立色谱分离与质谱检测方法。
• 完成选择性、基质效应及稳定性验证。

4. 样本检测

• 批量处理客户样本，同步运行质控样品（QC）与标准曲线。

5. 数据分析

• 使用Skyline/MultiQuant软件进行峰积分与浓度计算。
• 生成修饰肽段定量热图及变异系数（CV）统计表。

6. 报告交付

• 提供结构化数据包（包括原始图谱、验证报告、浓度结果）。