ELISPOT平台免疫分析

服务背景

ELISPOT（酶联免疫斑点法）是一种高灵敏度、单细胞水平的免疫分析技术，可定量检测分泌特定细胞因子（如IFN-γ、IL-2、Granzyme B等）的免疫细胞（如T细胞、B细胞），广泛应用于疫苗免疫原性评估、感染性疾病免疫应答研究、肿瘤免疫治疗及自身免疫疾病机制探索。我们基于自动化ELISPOT平台，提供从实验设计到数据解读的全流程服务，支持药物研发、临床研究及基础科研需求。

ELISPOT平台免疫分析

华测医药 · 临床生物分析服务为您提供ELISPOT平台免疫分析服务，拥有15000m²实验空间及350多台设备，覆盖GLP、CNAS等认证，以高通量支持生物分析，提供高附加值合同外服务，优化研发流程，致力于解决各类临床需求，助力新药研发与上市。

▮ 细胞因子检测

•Th1/Th2细胞应答分析：检测IFN-γ、IL-4、IL-5等标志性细胞因子，评估免疫应答极化方向。

•细胞毒性T细胞活性：通过Granzyme B、Perforin释放水平量化CTL杀伤能力。

•多重检测：支持双色ELISPOT（如IFN-γ/IL-2联检）实现多功能T细胞亚群分析。

▮ 抗原特异性免疫应答评估

•肽库刺激实验：1）合成重叠肽库（如病毒抗原、肿瘤新抗原）激活抗原特异性T细胞；2）检测抗原特异性T细胞频率及功能。

•疫苗效力评价：定量接种后外周血单核细胞（PBMC）的抗原特异性应答强度。

▮ 定制化检测开发

•靶标扩展：针对客户需求开发新型细胞因子（如IL-17、TNF-α）检测方法。

•样本类型适配：优化全血、组织浸润淋巴细胞（TIL）等复杂样本的前处理流程。

▮ 数据标准化与质控

•阳性/阴性对照设置：使用PHA/SEB作为阳性对照，空白孔作为阴性对照。

•自动化斑点计数：采用ImmunoSpot®或AID iSpot系统，避免人工计数偏差。

应用场景

✓ 疫苗开发

• 评估新冠疫苗、HPV疫苗等的T细胞免疫原性。

 

✓ 肿瘤免疫治疗

• 监测CAR-T细胞治疗前后肿瘤抗原特异性T细胞动态变化。

 

✓ 感染性疾病研究

• 分析HIV、HCV感染者体内病毒特异性CTL应答强度。

 

✓ 自身免疫疾病

• 检测类风湿性关节炎患者中自身抗原特异性Th17细胞活性。

 

✓ 移植免疫

• 评估器官移植后供体特异性免疫耐受状态。

服务优势

   高灵敏度   

• 可检测低至1/100,000频率的抗原特异性T细胞，精准解析微弱免疫应答。

   单细胞分辨率   

• 直接量化分泌活性细胞因子的功能性细胞，优于传统ELISA或流式细胞术。

   合规性支持   

• 实验流程符合GLP/GCP标准，数据满足疫苗临床研究（如FDA CBER指南）申报要求。

   高通量检测   

• 支持96孔/384孔板操作，单次实验可完成多组平行样本分析。

   专业团队   

• 10+年免疫分析经验，熟悉技术难点（如低背景噪音控制、弱信号增强）。

服务流程

1. 需求沟通

• 明确检测目标（如靶细胞因子、抗原类型）、样本类型及交付要求。

2. 实验设计

• 抗原选择：合成肽段、重组蛋白或病原体裂解物。
• 板预处理：包被捕获抗体（如抗IFN-γ单抗），封闭非特异性结合位点。

3. 样本处理与刺激

• PBMC分离：Ficoll密度梯度离心法获取高活性PBMC。
• 细胞刺激：抗原/对照刺激物与细胞共孵育（通常16-48小时）。

4. 斑点显色与分析

• 检测抗体孵育：生物素化检测抗体+酶标链霉亲和素（如HRP/AP标记）。
• 底物显色：使用TMB或BCIP/NBT生成不溶性斑点。
• 自动化扫描：统计斑点数量/大小，计算每百万细胞中活性细胞频率（SFU/10^6 cells）。

5. 数据报告

• 提供原始图像、斑点计数表及统计学分析（如组间差异显著性检验）。